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（一）亞克隆  亞克隆至適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體 ， 制備大量質(zhì)粒  ，構(gòu)建線性化載體。
    （二）表達(dá)及評(píng)估  將構(gòu)建好的線性化載體轉(zhuǎn)入合適的寄主菌株中，通過(guò)PCR方法確定陽(yáng)性轉(zhuǎn)化株，表達(dá)確認(rèn)，SDS-PAGE以及Western blot分析。

（三）少量表達(dá)及純化 1L酵母培養(yǎng)物表達(dá)，一步法純化，或附加純化至純度最低可達(dá)90%。

（四）大規(guī)模蛋白制備及純化 (可選擇)。