大腸桿菌蛋白表達
來源：admin 瀏覽量： 發布時間：2018-04-28 13:58:12
(一) 基因設計及合成我們為客戶提供密碼子、GC含量和特殊基因序列的優化等基因設計工作，能提高轉錄和翻譯效率，提高mRNA穩定性。
(二) 載體構建 我們有如pET21a（+），pET28a(+)、pGEX系列等三十多種成熟原核表達載體可供選擇，這些載體分別具有提高表達量、促進分泌表達、促進可溶表達、促進二硫鍵形成等特征。并可針對目的蛋白性質、制備工藝要求以及大腸桿菌系統的特點，優化基因序列和載體構建，以求得到最優的表達系統等。在構建表達載體時主要通過以下幾方面進行優化：1）啟動子的選擇，提供強啟動子、中強啟動子及弱啟動子的選擇；2）信號肽的選擇，提供多種不同分泌機制的信號肽供選擇，找到最優的表達信號肽；3）促表達伴侶分子的選擇，有多種促可溶表達分子伴侶、促二硫鍵形成分子伴侶、促折疊分子伴侶可供選擇；4）純化標簽的選擇，為方便純化制備，提供多種親和純化標簽供選擇，如His6標簽、GST標簽、MBP標簽、Strep標簽等。
(三) 表達菌株建立及小量誘導表達 我們擁有BL21(DE3)、BLR(DE3)、BL21(DE3) Star、等十多種表達宿主菌可供選擇，主要從增強質粒穩定性、提高表達量、促進含稀有密碼子基因的表達、提供胞內蛋白二硫鍵形成環境、促進毒性蛋白表達等方面進行表達菌株的選擇，并進行小量誘導表達和檢測。
(四) 重組蛋白大規模 表達工藝優化我們可以為客戶提供3L、10L等不同量級的蛋白發酵工藝的優化，主要從培養方式、培養基配制、培養液pH、培養溫度、培養時間等多個角度入手，對重組蛋白的大規模表達工藝進行優化。
(五) 內毒素控制與去除 系統表達的蛋白產品會夾帶大量內毒素殘留，其主要來源為大腸桿菌細胞壁成分脂多糖。內毒素因為其本身異質性，分子大小不一、疏水性很強、帶很強負電荷，往往與目的蛋白結合在一起，極不易分開，所以去除起來很困難，迄今并無很好的方法。我們通過全流程控制和針對性去除相結合的方法控制殘留水平.
(六) 蛋白鑒定我們熟練掌握SDS-PAGE、蛋白濃度檢測、western blot、流式細胞術等定性或者定量分析的方法進行重組蛋白鑒定。
